El objetivo es investigar el impacto de la regulación negativa de miR-185-5p en la proliferación, migración y capacidad autofágica de las células de cáncer de pulmón que apuntan a la proteína membrana nueve veces (TM9SF1). Los datos del conjunto de datos GSE51853 se descargaron en la base de datos de expresión génica GEO para analizar la expresión de miR-185-5p en los tejidos de cáncer de pulmón. Las proteínas objetivo de miR-185-5p fueron predichas utilizando las bases de datos en línea miRTargetLink, miRTarbase y DIANA-microT-CD, y las proteínas relacionadas con la autofagia se descargaron de la base de datos HADb, luego los resultados obtenidos de los 4 bases de datos se intersecaron, y las curvas de supervivencia de VEGFA y TM9SF1 se analizaron a través de la base de datos StarBase. Los plásmidos reporteros TM9SF1 3'UTR(WT) o TM9SF1 3'UTR(MUT) fueron co-transfectados en las células HEK-293T con plásmidos de control miR-185-5p (CON) o plásmidos de sobreexpresión miR-185-5p (over-miR-185-5p), y el experimento de gen reportero de doble luciferasa se utilizó para detectar sitios de unión de miR-185-5p con TM9SF1 y la actividad de luciferasa. La sobreexpresión de miR-185-5p fue detectada por Western blotting en las células A549 transfecadas con plásmidos de sobreexpresión miR-185-5p. Las células A549 fueron divididas en (1) grupo CON+NC: transfección de plásmidos de control miR-185-5p y plásmidos de control TM9SF1; (2) grupo over-miR-185-5p+NC: transfección de plásmidos de sobreexpresión miR-185-5p y plásmidos de control TM9SF1; (3) grupo over-miR-185-5p+over-TM9SF1: transfección de plásmidos de sobreexpresión miR-185-5p y plásmidos de sobreexpresión TM9SF1. Los efectos del enlace específico de miR-185-5p a TM9SF1 sobre la proliferación y migración de las células de cáncer de pulmón se confirmaron mediante los experimentos de proliferación celular EdU, de raspadura y de migración Transwell. El flujo autofágico fue detectado por el virus lento stubRFP-sensGFP-LC3, y los cambios en el flujo autofágico y el potencial de membrana mitocondrial (MMP) de las células de cáncer de pulmón fueron detectados por el experimento JC-1. Los datos del conjunto de datos GSE51853 mostraron que la expresión de miR-185-5p en los tejidos de cáncer de pulmón era significativamente más baja que en los tejidos pulmonares normales (P<0.01); los resultados de qRT-PCR mostraron que la expresión de miR-185-5p en las células de cáncer de pulmón NCI-H1299 y A549 era más baja que en las células epiteliales pulmonares normales BEAS-2B(P<0.01). Los resultados de las predicciones de las bases de datos en línea miRTargetLink, miRTarbase, DIANA-microT-CD y HADb mostraron que miR-185-5p puede regular la proteína relacionada con la autofagia TM9SF1. Los experimentos de gen reportero de doble luciferasa y los resultados de Western blotting mostraron que miR-185-5p puede unirse directamente a la región 3'UTR del ARNm de TM9SF1, y que la sobreexpresión de miR-185-5p resulta en una disminución en la expresión de la proteína objetivo TM9SF1(P<0.05). Los resultados de los experimentos de proliferación celular EdU, de raspadura y de migración Transwell mostraron que la sobreexpresión de miR-185-5p puede inhibir la proliferación y migración de las células cancerosas de pulmón, y que la sobreexpresión de TM9SF1 puede atenuar el efecto inhibitorio de miR-185-5p sobre la proliferación y migración de las células cancerosas de pulmón(P<0.05). Los resultados del experimento de virus lent stubRFP-sensGFP-LC3 mostraron que el flujo autofágico en las células A549 aumenta después de la sobreexpresión de miR-185-5p, pero disminuye después de la sobreexpresión tanto de miR-185-5p como de TM9SF1, y los resultados del experimento JC-1 mostraron que el potencial de membrana mitocondrial (MMP) en las células A549 disminuye después de la sobreexpresión de miR-185-5p, pero aumenta después de la sobreexpresión tanto de miR-185-5p como de TM9SF1. Es posible que miR-185-5p afecte la proliferación, migración y autofagia de las células cancerosas de pulmón al regular negativamente la expresión de TM9SF1.

Cáncer de pulmón;miR-185-5p;TM9SF1;Proliferación y migración;Autofagia