El objetivo es investigar el efecto de las nanovesículas similares a exosomas derivadas de espino (HDELNs) sobre el daño inducido por trimetilamina N-óxido (TMAO) en células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVECs) y sus mecanismos. Métodos: Cultivo de HUVECs primarias en medio especializado; extracción de HDELNs del espino mediante centrifugación diferencial y centrifugación en gradiente de densidad de sacarosa. Identificación de HDELNs por microscopía electrónica de transmisión, análisis de seguimiento de nanopartículas, tinción con azul de Coomassie y Western blot. (1) Grupos control (HUVECs cultivadas normalmente), grupos con gradiente de concentración de TMAO (150, 300, 600, 900, 1800, 3600 μmol/L tratados durante 24 h), grupos con gradiente temporal (900 μmol/L de TMAO tratados durante 4, 8, 12, 24, 48 h), grupos con gradiente de concentración de HDELNs (1×10^6 a 1×10^11 partículas/ml tratados durante 24 h). Viabilidad celular medida con CCK-8; expresión proteica de ICAM-1, VCAM-1, MMP-9 e IL-1β medida por Western blot. (2) Grupos control, TMAO, HDELNs y TMAO+HDELNs; evaluación de viabilidad celular y niveles proteicos ICAM-1, VCAM-1, MMP-9, IL-1β, eNOS, PPAR-γ; expresión de PPAR-γ por qPCR; contenido de ATP, actividad SOD, potencial de membrana mitocondrial, ROS y superóxido detectados por métodos fluorescentes. (3) Grupos adicionales con inhibidores y agonistas de PPAR-γ a diferentes concentraciones junto con TMAO y HDELNs. (4) Evaluaciones combinadas. Resultados: La centrifugación diferencial y el gradiente de sacarosa permitieron extraer nanovesículas homogéneas con doble membrana del espino. La tinción con azul de Coomassie reveló bandas proteicas en HDELNs. CCK-8 mostró que 900 μmol/L de TMAO durante 24 h redujo significativamente la viabilidad de HUVECs (P<0.01), mientras que 1×10^7 partículas/ml de HDELNs la restauraron (P<0.01). Western blot mostró aumentos significativos en ICAM-1, VCAM-1, MMP-9 e IL-1β con TMAO (P<0.05), y disminución de eNOS (P<0.01), revertidos por HDELNs (P<0.05). La assays de luciferasa mostraron una caída en ATP inducida por TMAO (P<0.0001) recuperada por HDELNs (P<0.0001). La actividad SOD2 reducida por TMAO (P<0.01) se recuperó con HDELNs (P<0.001). Las sondas fluorescentes detectaron aumento en ROS y disminución del potencial mitocondrial con TMAO (P<0.01), revertido por HDELNs (P<0.001). Western blot y qPCR mostraron disminución en la expresión de PPAR-γ por TMAO (P<0.01), restaurada por HDELNs (P<0.05). Ensayos con antagonista PPAR-γ T0070907 (30 μmol/L) inhibieron el efecto reparador de HDELNs (P<0.05), mientras que el agonista rosiglitazona (50 μmol/L) lo promovió (P<0.05). Conclusión: HDELNs reducen significativamente el daño en HUVECs causado por TMAO, posiblemente a través de la vía de señalización PPAR-γ.

aterosclerosis;exosomas de origen vegetal;receptor activado por proliferador de peroxisoma γ