El objetivo es construir un sistema de detección inmediata para el virus sincitial respiratorio (VSR) tipo A basado en la amplificación por recombinasa polimerasa (RPA) en un solo tubo联合CRISPR/Cas12a y evaluar su desempeño y potencial de aplicación clínica. Método: dirigidos a la secuencia genética conservada que codifica la proteína M del VSR-A, se diseñaron y sintetizaron cebadores, ARN guía (crRNA) para la proteína CRISPR/Cas12a y una sonda, y se construyó y optimizó una plataforma de detección RPA-CRISPR/Cas12a en un solo tubo; se utilizó ya sea un PCR en tiempo real con fluorescencia o una tira de cromatografía lateral para lectura inmediata de la señal de detección; se desarrollaron esquemas de detección inmediata fluorescente y de tira para RPA-CRISPR/Cas12a; se analizaron la sensibilidad y especificidad de ambas técnicas utilizando plasmidos y virus falsos como plantilla; se evaluaron 39 muestras reales que contenían VSR-A u otros tres virus de síndrome respiratorio febril para analizar la concordancia de los resultados del sistema de detección inmediata con el estándar de oro RT-qPCR mediante el coeficiente Kappa. Resultados: la detección inmediata fluorescente RPA-CRISPR/Cas12a en un solo tubo pudo detectar 6.1×10⁻¹ copias/μl del virus falso en 30 minutos a 37 ℃; la detección inmediata mediante tira pudo detectar 6.1×10¹ copias/μl en las mismas condiciones en 35 minutos; no hubo reacciones cruzadas con otros tres virus; los resultados en muestras reales mostraron especificidad del 100 % (15/15) y sensibilidad de 95.8 % (23/24) y 91.7 % (22/24) respectivamente; los coeficientes Kappa de concordancia con RT-qPCR fueron 94.7 % y 89.4 %. Conclusión: el sistema de detección inmediata establecido para VSR-A tiene alta sensibilidad y especificidad y puede ser una herramienta eficaz para el diagnóstico clínico y la vigilancia epidemiológica de la infección por VSR-A.

Virus sincitial respiratorio tipo A; amplificación por recombinasa polimerasa; sistema CRISPR-Cas12a; tira de cromatografía lateral