Optimización del cultivo de órganos renales y estudio preliminar de su aplicación

Shi Wen-Ying ,  

Xu Li-Jia ,  

Rui Hong-Liang ,  

Zhang Sen ,  

Zhou Xun-Rong ,  

摘要

El propósito es construir órganos renales de clase y varios modelos de lesión renal aguda y crónica. Método para inducir la formación de órganos renales mediante la vía de activación de CHIR99021-factor de crecimiento fibroblástico (FGF) utilizando células madre embrionarias humanas. Se estimulan órganos renales con 20, 30 y 50 μmol/L de cisplatino para construir un modelo de órganos renales con lesión aguda de túbulos renales inducida por cisplatino, y se estimulan con 30 μmol/L de cisplatino durante 12, 24 y 48 h para observar la tendencia de la lesión. Se utiliza PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) y la inmunohistoquímica (IHC) para detectar la expresión de marcadores de lesión renal e inflamación. Se construyen modelos de inducción de fibrosis de órganos renales con alto contenido de glucosa (cambio cada dos días) y con un medio de cultivo con 25 mmol/L de glucosa (sin cambio) durante 6 días. Se detectan los niveles de expresión de los marcadores de fibrosis renal Col Ⅲ, factor de crecimiento transformante β (TGF-β) y oronectina a través de Western blotting, RT-qPCR e IHC. Los órganos de clase se forman inicialmente con una estructura tubular el octavo día y tienen una forma óptima el decimocuarto día, lo que permite su uso en estudios posteriores. La tinción de marcadores específicos, como el túbulo renal proximal (lectina de loto, LTL), el túbulo renal distal (cadherina1, CDH1) y el túbulo de conexión (uromodulina, UMOD), y la tinción de HE, demuestran la formación de órganos renales. Los niveles de expresión de KIM-1, NGAL, TNF-α, IL-1β y CCL2 aumentan significativamente después de la estimulación con cisplatino, lo que indica una lesión renal aguda. El órgano con lesión renal inducida por 30 μmol/L de cisplatino es óptimo, y la expresión de NGAL y KIM-1 aumenta con el tiempo de estimulación. La expresión de oronectina, Col Ⅲ y TGF-β aumenta significativamente en los dos modelos de alto contenido de glucosa, pero el modelo de simulación de fluctuaciones de glucosa en sangre es mejor que el modelo de alto contenido de glucosa continuo. Conclusiones: el uso de un proceso de cultivo optimizado puede construir eficazmente órganos renales y puede usarse para construir diversos modelos de lesión renal aguda y crónica.

关键词

riñón; órgano de clase; células madre pluripotentes inducidas; lesión renal por cisplatino; nefropatía diabética

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