Целью исследования является изучение влияния связывающего белка X-box 1 (XBP1), происходящего из макрофагов типа M2, посредством регуляции сродственного стерол-регуляторного элемент-связывающего белка 2 (SREBP2) на устойчивость клеток колоректального рака (CRC) к оксалиплатину (Ox). Метод: клеточные линии HCT116, SW480 и LoVo культивировали в среде с Ox в течение 48 часов, выбрали наиболее чувствительную к Ox клеточную линию и создали клетки устойчивые к CRC-Ox методом постепенного увеличения концентрации препарата. Использовали среду M0 (M0-CM) и среду M2 (M2-CM) для обработки чувствительных к Ox родительских клеток (HCT116-S) и устойчивых к Ox клеток (HCT116-R), наблюдали влияние M0-CM и M2-CM на HCT116-S и HCT116-R, разделяя их на группы M0-CM+HCT116-S, M2-CM+HCT116-S, M0-CM+HCT116-R и M2-CM+HCT116-R. Для изучения влияния активации XBP1 в макрофагах M2 на рост клеток HCT116 и устойчивость к Ox разделили клетки HCT116-R на группу с отрицательным контролем переэкспрессии M2-CM (M2^oe-NC-CM; макрофаги M2 трансфицированы oe-NC, среда культивирования создана и совместно культивирована с HCT116-R), группу M2^oe-NC-CM+Ox (макрофаги M2 трансфицированы oe-NC, созданная среда совместно с HCT116-R, обработанными 4 мкг/мл Ox), группу M2^oe-XBP1-CM (макрофаги M2 трансфицированы плазмидой переэкспрессии XBP1, среда совместно с HCT116-R) и группу M2^oe-XBP1-CM+Ox (макрофаги M2 трансфицированы плазмидой переэкспрессии XBP1, среда совместно с HCT116-R, обработанными 4 мкг/мл Ox). Для изучения влияния снижения экспрессии SREBP2 на клетки HCT116-R разделили клетки на контрольную группу, группу с малой интерферирующей РНК против SREBP2 (si-SREBP2), группу M2^oe-XBP1-CM и группу si-SREBP2+M2^oe-XBP1-CM. Использовали метод CCK-8, тест Transwell, проточную цитометрию для оценки жизнеспособности, способности к инвазии и апоптозу клеток HCT116. Уровень мРНК SREBP2 определяли с помощью qRT-PCR, экспрессию белков XBP1 и SREBP2 - методом вестерн-блоттинга. В подкожной модели у голых мышей инокцировали макрофаги M2 с трансфекцией пустого вектора или oe-XBP1 и клетки HCT116, сравнивали объемы и массы опухолей, уровни экспрессии XBP1 и SREBP2 методом иммуногистохимического окрашивания. Результаты: по данным CCK-8 жизнеспособность клеток HCT116 значительно подавлялась Ox по сравнению с SW480 и LoVo (P<0,05). В группе M2-CM+HCT116-S жизнеспособность и инвазивность клеток значительно возросли, а уровень апоптоза снизился по сравнению с M0-CM+HCT116-S (P<0,05); подобные изменения наблюдались в группе M2-CM+HCT116-R по сравнению с M0-CM+HCT116-R (P<0,05). Уровень белка XBP1 в HCT116-R был значительно выше в группе M2-CM+HCT116-R, чем в M0-CM+HCT116-R (P<0,05). По сравнению с M2^oe-NC-CM наблюдалось увеличение жизнеспособности и инвазивности и снижение апоптоза в группе M2^oe-XBP1-CM (P<0,05). Переэкспрессия XBP1 значительно повышала уровни мРНК и белка SREBP2 по сравнению с M2^oe-NC-CM+Ox (P<0,05). По сравнению с контролем снижение SREBP2 (si-SREBP2) приводило к уменьшению жизнеспособности и инвазии и увеличению апоптоза (P<0,05). В группе si-SREBP2+M2^oe-XBP1-CM по сравнению с M2^oe-XBP1-CM снижались жизнеспособность и инвазия и повышался апоптоз (P<0,05). In vivo переэкспрессия XBP1 обращала ингибирующее воздействие Ox на рост опухолей (P<0,05) и увеличивала экспрессию SREBP2 (P<0,05). Заключение: XBP1, происходящий из макрофагов типа M2, способствует резистентности клеток колоректального рака к Ox путем активации SREBP2.

Макрофаги типа M2; белок связывания X-box 1; колоректальный рак; оксалиплатин