Цель исследования состоит в изучении ингибиторного действия антимикробного пептида WK-13-3D на клетки тройного отрицательного рака груди MDA-MB-231 и его возможный механизм. Методы: Эффект антимикробного пептида WK-13-3D в концентрациях 0, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 мкмоль/л на пролиферацию клеток MDA-MB-231 был исследован с использованием метода CCK-8; эксперимент pull down позволил выяснить взаимодействие антимикробного пептида WK-13-3D с белками клеток MDA-MB-231. Клетки MDA-MB-231 были обработаны средой с 0, 10 и 20 мкмоль/л антимикробного пептида WK-13-3D или без него, затем проводились определение апоптоза с использованием проточной цитометрии, а также анализ экспрессии белка BiP, протеинкиназы R-подобной эндоплазматической сети (PERK), эукариотического инитиаторного фактора трансляции 2α (eIF2α), фосфорилированного eIF2α (p-eIF2α) и белка Bax с использованием метода Western blotting; также были осуществлены определение экспрессии белков BiP, PERK, eIF2α, p-eIF2α и Bax методом Western blotting в клетках MDA-MB-231, в которых были затихани доступности антимикробный пептид WK-13-3D, или применялись пустые вектор си-R-592 и вектор си-R-592 и антимикробный пептид WK-13-3D в концентрации 10 мкмоль/л. 12 мышей BALB/c были случайным образом разделены на группы PBS (n=4), TAX (n=4) и WK-13-3D (n=4). Всем мышам были подкожно инъецированы клетки MDA-MB-231 для создания модели трансплантации опухоли тройного отрицательного рака груди. Группе WK-13-3D подкожно вводили антимикробный пептид WK-13-3D в дозе 200 мг/(кг*день), группе TAX внутрьперитонеально инъецировали TAX в дозе 200 мг/(кг*день), группе PBS вводили такой же обьем PBS. Через 2 недели после инъекции мышей их убили, измерили вес и объем опухоли и сделали фотографию. Экспрессию белков BiP и Ki-67 в опухоли мышей проверили методом иммуноцитохимии. Результаты: Результаты исследования CCK-8 показали, что с ростом концентрации антимикробного пептида WK-13-3D прижизненность клеток MDA-MB-231 убывала, половина ингибирующей концентрации (IC₅₀) составляла 19,82 мкмоль/л. В ходе эксперимента pull down было обнаружено 268 соответствий взаимодействия антимикробного пептида с белками клеток MDA-MB-231, основные из которых - BiP, 90β1 тепловой шоковый белок (HSP90B1), белок валозин-контентинасисе рабдо(или валозин-контентинасисе, VCP), 71 кД человеческий гомолог белка теплового шока (HSPA8) и др. В сравнении с контрольной группой, обработка клеток MDA-MB-231 антимикробным пептидом WK-13-3D в концентрациях 10 и 20 мкмоль/л привела к значительному увеличению уровня апоптоза (P<0,05 или P<0,01), значительному снижению уровня экспрессии белка BiP (P<0,05), значительному увеличению уровня экспрессии белков PERK, p-eIF2α, Bax (P<0,05 или P<0,01), при этом уровень экспрессии белка eIF2α особо не изменялся (P>0,05). По сравнению с контрольной группой, в клетках MDA-MB-231 в которых ингибировали доступность антимикробного пептида WK-13-3D или используя пустой вектор си-R-592, наблюдалось значительное снижение уровня экспрессии белка BiP (P<0,05), значительное увеличение уровня экспрессии белков PERK, p-eIF2α, Bax (P<0,05 или P<0,01), при этом уровень экспрессии белка eIF2α особо не изменялся (P>0,05); в сравнении с группой си-R-592, в клетках MDA-MB-231 в которых ингибировали доступность антимикробного пептида WK-13-3D и используя пустой вектор си-R-592 наблюдалось снижение уровня экспрессии белка BiP (P<0,05), увеличение уровня экспрессии белков PERK, p-eIF2α, Bax (P<0,05 или P<0,01), при этом уровень экспрессии белка eIF2α особо не изменялся (P>0,05). Опухоли мышей, которым были введены антимикробный пептид WK-13-3D и TAX, имели значительно меньший объем по сравнению с группой PBS (P<0,05), результаты иммуноцитохимической окраски показали, что после лечения антимикробным пептидом WK-13-3D доля положительных клеток Ki-67 и BiP в ткани опухоли у мышей стала значительно меньше, чем в группе PBS (P<0,01). Выводы: Антимикробный пептид WK-13-3D может ингибировать пролиферацию клеток MDA-MB-231, причем его механизм возможно заключается в активации эндоплазматического ретикулумного стресса и индукции апоптоза.

Антимикробный пептид, тройной отрицательный рак груди, эндоплазматический ретикулумный стресс, апоптоз