Целью является изучение влияния активации члена семейства белков с последовательным сходством 83D (FAM83D) пути Wnt/β-катинин на аутофагию, миграцию и инвазивные способности клеток тройного отрицательного рака молочной железы (TNBC) и его механизма действия. Методы: (1) Анализ экспрессии FAM83D в опухолевых тканях TNBC на основе базы данных генома рака (TCGA) и ее связи с патологической стадией и прогнозом пациентов. (2) Определение экспрессии FAM83D в клеточных линиях TNBC (MDA-MB-231, MDA-MB-468 и BT549) методом qRT-PCR. (3) Использование клеток MDA-MB-231, разделение на группы: NC (трансфекция NC РНК), pcDNA 3.1(+) (трансфекция рекомбинантного плазмида pcDNA 3.1(+)-FAM83D), siRNA (трансфекция siRNA FAM83D). Наблюдение аутофагии методом MDC, Western blot для выявления аутофагосвязанных молекул (Beclin1, белок, связанный с аутофагией 5 (ATG5) и микротрубочный связанный белок 1A/1B-легкая цепь 3 (LC3)) и маркеров сигнального пути Wnt/β-катинин (Wnt3a, член семейства немелких интегративных сайтов MMTV 3a, β-катинин). Оценка пролиферации клеток методом CCK-8, миграции и инвазии методом царапинного заживления и Transwell. Результаты: Экспрессия FAM83D в опухолевых тканях и клеточных линиях TNBC значительно выше, чем в параксанальных тканях и нормальных эпителиальных клетках молочной железы человека (P<0.001), а уровень экспрессии в опухолевых тканях пациентов с средней и поздней стадией выше, чем у пациентов на ранней стадии (P<0.001), и коррелирует с прогнозом пациентов отрицательно (P<0.05). Переэкспрессия гена FAM83D значительно стимулирует пролиферацию, миграцию, инвазию и аутофагию клеток MDA-MB-231 (P<0.05), одновременно повышая экспрессию белков Beclin1, ATG5, Wnt3a, β-катинин и способствуя превращению LC3-I в LC3-Ⅱ (P<0.05). Редукция экспрессии FAM83D значительно подавляет пролиферацию, миграцию, инвазию и аутофагию клеток MDA-MB-231 (P<0.05), снижая уровень белков Beclin1, ATG5, Wnt3a, β-катинина и препятствует превращению LC3-I в LC3-Ⅱ (P<0.05). Заключение: FAM83D, возможно, способствует аутофагии, миграции и инвазии клеток TNBC путем активации сигнального пути Wnt/β-катинин.
关键词
тройной отрицательный рак молочной железы;член семейства белков с последовательным сходством 83D;аутофагия;путь Wnt/β-катинин;миграция и инвазия