Целью является создание системы мгновенного обнаружения респираторно-синцитиального вируса (RSV) типа A на основе однотрубного амплификации рекомбинантной полимеразой (RPA)联合CRISPR/Cas12a и оценка ее детекционной производительности и клинического потенциала. Метод: на основе консервативной генетической последовательности, кодирующей белок M RSV-A, были разработаны праймеры, направляющая РНК crRNA для распознавания белка CRISPR/Cas12a и зонд; построена и оптимизирована платформа однотрубного RPA-CRISPR/Cas12a; использовались либо ПЦР с реальным временем и флуоресцентным детектированием, либо полоска для латеральной хроматографии для мгновенного считывания сигнала. Разработаны решения для мгновенного флуоресцентного и тест-полосочного обнаружения RPA-CRISPR/Cas12a; на основе плазмид и псевдовируса проанализированы чувствительность и специфичность двух систем мгновенного обнаружения; 39 реальных образцов с RSV-A или тремя другими вирусами респираторного синдрома с лихорадкой были протестированы для оценки соответствия результатов с золотым стандартом RT-qPCR с помощью коэффициента Каппа. Результаты: однотрубное флуоресцентное мгновенное обнаружение RPA-CRISPR/Cas12a может выявлять 6,1×10⁻¹ копий/мкл псевдовируса при 37 ℃ в течение 30 минут; полосочное мгновенное обнаружение – 6,1×10¹ копий/мкл при тех же условиях в течение 35 минут; отсутствие перекрестной реакции с другими тремя вирусами; результаты на реальных образцах показали 100% специфичность (15/15) и чувствительность 95,8% (23/24) и 91,7% (22/24) соответственно; коэффициент соответствия Каппа с RT-qPCR составил 94,7% и 89,4%. Вывод: разработанная система мгновенного обнаружения RSV-A обладает высокой чувствительностью и специфичностью и может служить эффективным инструментом для клинической диагностики и эпидемиологического наблюдения за RSV-A.

Респираторно-синцитиальный вирус типа A;амплификация рекомбинантной полимеразой;система CRISPR-Cas12a;полоска для латеральной хроматографии