Цель - создание почечных органов и моделей острого и хронического почечного повреждения. Метод - проведение эксперимента по формированию почечных органов с использованием человеческих эмбриональных стволовых клеток с использованием пути активации CHIR99021-фактор роста фибробластов (FGF). Стимуляция почечных органов цисплатином в концентрациях 20, 30 и 50 мкмоль/л для построения модели повреждения почечных канальцев острого почечного повреждения, и стимуляция цисплатином в концентрации 30 мкмоль/л в течение 12, 24, 48 часов для наблюдения тенденции изменения его повреждения, использование методов реального времени количественной обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (RT-qPCR) и иммуноцитохимии (IHC) для обнаружения уровня выражения индикаторов почечного повреждения и воспалительных факторов. Использование питательных сред с содержанием 5 и 25 ммоль/л глюкозы (смена раз в два дня) и с содержанием 25 ммоль/л глюкозы (непрерывное содержание) в течение 6 дней для построения моделей подвергания почечных органов фиброзу при высокой глюкозе и непрерывном присутствии глюкозы, при использовании методов вестерн-блоттинга, RT-qPCR и IHC для обнаружения уровня выражения белковых индикаторов почечного фиброза коллагена III (Col III), трансформирующего фактора роста бета (TGF-β) и оронектина. Результаты - Органы начинают образовывать трубчатую структуру на 8-й день, и оптимальное формирование происходит на 14-й день, что позволяет использовать их для последующих исследований. Окрашивание специфических маркеров ближних почечных канальцев (ликтининь-специя, LTL), дальних почечных канальцев (кальций-связывающий белок 1, CDH1), соединительных канальцев (мочевая регулирующая гормона, UMOD) и окрашивание гематоксилином и эозином подтверждают формирование почечного органа. Уровни экспрессии индикаторов почечного повреждения 1 (KIM-1), нейтрофильной желатиназы-связанный липид-переносчик (NGAL), фактора некроза опухоли-α (TNF-α), интерлейкина-1β (IL-1β) и легочного эпителиального клет -1β) и фактора хемотакта-1β) и фактора хемотакта-1β) в повышении уровня экспрессии после стимуляции цисплатином, что указывает на возникновение острого почечного повреждения, 30 мкмоль/л цисплатина приводит к оптимальному почечному повреждению, и экспрессия NGAL и KIM-1 увеличивается с увеличением стимуляции. В обеих моделях почечных органов с высоким уровнем глюкозы выражение оронектина, Col III и TGF-β заметно увеличиваются, но модель имитации колебаний уровня глюкозы лучше, чем модель непрерывной высокой глюкозы. Вывод - Использование оптимизированного процесса выращивания может эффективно построить почечные органы и использоваться для построения моделей острого и хронического почечного повреждения.

Почки; органы; индуцированные плюрипотентные стволовые клетки; почечное повреждение, вызванное цисплатином; почечная болезнь при сахарном диабете