Efeito da ativação de FAM83D na via Wnt/β-catenina sobre a autofagia, migração e capacidade invasiva de células do câncer de mama triplo negativo

Liu Xin-Li ,  

Liu Gai-Qin ,  

Yang Ye ,  

Liang Yin ,  

Meng Jin ,  

摘要

O objetivo é investigar o efeito da ativação do membro D da família de proteínas com similaridade de sequência 83 (FAM83D) na via Wnt/β-catenina sobre a autofagia, migração e capacidade invasiva das células do câncer de mama triplo negativo (TNBC) e seu mecanismo de ação. Métodos: (1) Análise da expressão de FAM83D em tecidos cancerígenos de TNBC com base no Atlas do Genoma do Câncer (TCGA) e sua correlação com o estágio patológico e prognóstico dos pacientes. (2) Detecção da expressão de FAM83D em linhagens celulares TNBC (MDA-MB-231, MDA-MB-468 e BT549) por qRT-PCR. (3) Uso de células MDA-MB-231 divididas em grupo NC (transfecção com RNA NC), grupo pcDNA 3.1(+) [transfecção com plasmídeo recombinante pcDNA 3.1(+)-FAM83D], grupo siRNA (transfecção com siRNA FAM83D), observação da autofagia celular pelo método MDC, detecção por Western blot das moléculas relacionadas à autofagia intracelular (Beclin1, proteína relacionada à autofagia 5 (ATG5) e proteína associada a microtúbulos 1A/1B-cadeia leve 3 (LC3)) e moléculas marcadoras da via de sinalização Wnt/β-catenina (Wnt3a, membro da família de sítios de integração MMTV sem asas 3a, β-catenina), uso do método CCK-8 para detectar a viabilidade proliferativa celular, ensaio de cicatrização de feridas e ensaio Transwell para medir a migração e invasão celular. Resultados: A expressão de FAM83D em tecidos cancerígenos e linhagens celulares TNBC foi significativamente mais alta do que nos tecidos adjacentes e nas células epiteliais mamárias normais humanas (P<0.001), a expressão nos tecidos tumorais de pacientes em estágio intermediário e avançado foi maior do que em pacientes em estágio inicial (P<0.001) e se correlacionou negativamente com o prognóstico dos pacientes (P<0.05). A superexpressão do gene FAM83D promoveu significativamente a proliferação, migração, invasão e autofagia das células MDA-MB-231 (P<0.05), aumentou a expressão intracelular das proteínas Beclin1, ATG5, Wnt3a, β-catenina e favoreceu a conversão de LC3-I em LC3-II (P<0.05). A redução da expressão de FAM83D inibiu significativamente a proliferação, migração, invasão e autofagia das células MDA-MB-231 (P<0.05), reduzindo a expressão intracelular das proteínas Beclin1, ATG5, Wnt3a, β-catenina e suprimindo a conversão de LC3-I em LC3-II (P<0.05). Conclusão: FAM83D pode promover a autofagia, migração e invasão das células TNBC por meio da ativação da via de sinalização Wnt/β-catenina.

关键词

câncer de mama triplo negativo;membro da família de proteínas com similaridade de sequência 83D;autofagia;via Wnt/β-catenina;migração e invasão

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