O objetivo é investigar o efeito das nanovesículas semelhantes a exossomos derivadas do espinheiro-alvar (HDELNs) na lesão induzida por trimetilamina N-óxido (TMAO) em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) e seus mecanismos. Métodos: Cultivo primário de HUVECs em meio especializado; extração de HDELNs do espinheiro-alvar por centrifugação diferencial e centrifugação em gradiente de densidade de sacarose. Identificação das HDELNs por microscopia eletrônica de transmissão, análise de rastreamento de nanopartículas, coloração azul de Coomassie e Western blot. (1) Grupos controle (HUVECs cultivadas normalmente), grupos com gradiente de concentração de TMAO (150, 300, 600, 900, 1800, 3600 μmol/L, 24 h), grupos com gradiente temporal (tratamento com 900 μmol/L de TMAO por 4, 8, 12, 24, 48 h), grupos com gradiente de concentração de HDELNs (1×10^6 a 1×10^11 partículas/ml por 24 h). Viabilidade celular avaliada por método CCK-8; níveis de proteínas ICAM-1, VCAM-1, MMP-9 e IL-1β avaliados por Western blot. (2) Grupos controle, TMAO, HDELNs, TMAO+HDELNs; avaliação da viabilidade celular e expressão proteica de ICAM-1, VCAM-1, MMP-9, IL-1β, eNOS, PPAR-γ; expressão de PPAR-γ por qPCR; conteúdo de ATP, atividade de SOD, potencial da membrana mitocondrial, ROS e superóxido medidos por métodos fluorescentes. (3) Grupos adicionais com inibidores e agonistas de PPAR-γ em diferentes concentrações junto com TMAO e HDELNs. (4) Avaliações combinadas. Resultados: A centrifugação diferencial e o gradiente de densidade de sacarose permitiram a extração de nanovesículas homogêneas de dupla membrana do espinheiro-alvar. A coloração azul de Coomassie visualizou bandas proteicas em HDELNs. O método CCK-8 mostrou que 900 μmol/L de TMAO por 24 h reduziu significativamente a viabilidade das HUVECs (P<0.01), enquanto 1×10^7 partículas/ml de HDELNs restauraram essa viabilidade (P<0.01). Western blot indicou aumentos significativos em ICAM-1, VCAM-1, MMP-9 e IL-1β e diminuição de eNOS com TMAO (P<0.05), revertidos por HDELNs (P<0.05). Testes de luciferase mostraram redução de ATP induzida por TMAO (P<0.0001) e restauração por HDELNs (P<0.0001). A atividade da SOD2 reduzida por TMAO (P<0.01) foi restaurada por HDELNs (P<0.001). Sondas fluorescentes detectaram aumento de ROS e diminuição do potencial mitocondrial com TMAO (P<0.01), revertidos por HDELNs (P<0.001). Western blot e qPCR mostraram diminuição da expressão de PPAR-γ com TMAO (P<0.01), restaurada por HDELNs (P<0.05). O antagonista de PPAR-γ T0070907 (30 μmol/L) antagonizou o efeito reparador das HDELNs (P<0.05), enquanto o agonista rosiglitazona (50 μmol/L) promoveu (P<0.05). Conclusão: As HDELNs atenuam significativamente o dano das HUVECs induzido por TMAO, possivelmente por meio da via de sinalização PPAR-γ.

aterosclerose;exossomos de origem vegetal;receptor ativado pelo proliferador de peroxissoma γ