Proteína polcomb 2 promove a migração e invasão das células de glioma ativando a via de sinalização NF-κB

Ruan Jian-Qiao ,  

Wang Jing ,  

Zhang Ming-Hui ,  

Zhang Ning-Mei ,  

Cao Xiang-Mei ,  

摘要

Objetivo: observar o efeito da proteína polcomb 2 (PCL2) sobre a capacidade de movimento, migração das células de glioma e a expressão de proteínas relacionadas à matriz extracelular (ECM), explorando o papel do PCL2 na invasão do glioma. Métodos: análise da expressão do PCL2 em gliomas utilizando as bases de dados do Projeto do Genoma do Câncer (TCGA) e do Projeto do Genoma do Glioma Chinês (CGGA). Foram coletadas 90 amostras de tecido de glioma do Hospital Geral da Universidade de Medicina de Ningxia, com estatísticas sobre sexo, idade e local de ocorrência dos pacientes, e a expressão do PCL2 em gliomas de diferentes graus histológicos (II, III, IV) foi detectada por imuno-histoquímica. Foi construído um vetor lentiviral, e as células de glioma U87-MG foram divididas em grupo controle, grupo de superexpressão de PCL2 (hPCL2) e grupo de silenciamento de PCL2 (shPCL2). Experimentos de arranhão (scratch) e Transwell foram utilizados para medir a capacidade de movimento, migração e invasão das células U87-MG; o sequenciamento de transcriptoma (RNA-seq) analisou genes diferencialmente expressos (DEGs) e suas funções associadas; Western blot foi usado para detectar os níveis de proteínas relacionadas à ECM, como metaloproteinases da matriz (MMP) 7, MMP9, e fatores de transcrição relacionados à via NF-κB, como ativador do plasminogênio uroquinase (PLAU), interleucina-8 (IL-8) e inibidor tecidual de metaloproteinases 2 (TIMP2). Resultados: a análise dos dados das bases TCGA e CGGA mostrou que o nível de expressão do gene PCL2 no glioma é significativamente maior do que nos tecidos adjacentes (P<0.05), sendo significativamente maior em gliomas de alto grau (III, IV) em comparação com gliomas de baixo grau (II) (P<0.001). A taxa de positividade da expressão do PCL2 nos pacientes com glioma foi de 75,6% (68/90), sendo 48,3% (14/29) no grau II, 87,5% (14/16) no grau III e 82,2% (37/45) no grau IV. Os resultados dos experimentos de arranhão e Transwell mostraram que, em comparação com o grupo controle, o valor relativo do espaço de arranhão no grupo hPCL2 diminuiu (P<0.05), e o número de células migratórias aumentou significativamente (P<0.05); no grupo shPCL2, o espaço relativo de arranhão aumentou (P<0.05). A análise RNA-seq detectou 57 DEGs nos grupos hPCL2 e shPCL2 em comparação com o controle; foram detectados 119 DEGs entre os grupos hPCL2 e shPCL2; a análise de enriquecimento GO mostrou que as funções dos DEGs estavam principalmente relacionadas a vias de remodelação da ECM, etc. O Western blot mostrou que, em comparação com o controle, os níveis de MMP9, MMP7, PLAU e IL-8 aumentaram significativamente no grupo hPCL2 (P<0.05), enquanto o nível de TIMP2 diminuiu significativamente (P<0.05); no grupo shPCL2, os níveis de MMP9, MMP7, PLAU e IL-8 diminuíram significativamente (P<0.05) e o nível de TIMP2 aumentou significativamente (P<0.05). Conclusão: PCL2 pode aumentar a capacidade de movimento e migração das células de glioma, e seu mecanismo pode estar relacionado à ativação da via de sinalização NF-κB.

关键词

proteína polcomb 2;glioma;invasão;matriz extracelular;fator nuclear-κB

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