circ_0044556가 미R-338-3p/BRD4 축을 통해 TNBC 세포의 악성 생물학적 행동을 조절하는 작용과 분자 기전을 조사하는 것이 목적이다. circ_0044556이 miR-338-3p 및 miR-338-3p가 BRD4와 결합하는 부위를 TargetScan 온라인 플랫폼을 사용하여 예측하였다. MDA-MB-231 세포에서 circ_0044556, miR-338-3p 및 BRD4 간의 관계를 이중 발광 reporter gene assay로 확인하였다. quantitativer Echtzeit-PCR(qRT-PCR) 및 Western blotting을 사용하여 인간 TNBC 세포 라인 MDA-MB-231 및 정상 유방 상피 세포 MCF-10A에서 circ_0044556, miR-338-3p 및 BRD4 단백질의 발현을 조사하였다. MDA-MB-231 세포를 NC 그룹, si-NC 그룹(si-NC 전사체 전도) 및 si-circ_0044556 그룹(si-circ_0044556 전사체 전도)으로 분할하였다. qRT-PCR을 사용하여 circ_0044556 및 miR-338-3p의 발현, Western blotting을 사용하여 BRD4, 상피 칼슘 단백질(E-카드헤린), 신경 칼슘 단백질(N-카드헤린), 비만이드의 발현을 조사하였으며, CCK-8 방법을 사용하여 세포 증식 능력, 흐름 세포술을 사용하여 세포 아포토시스 상황, Transwell 실험을 사용하여 세포 침투 및 이동 능력을 조사하였다. 30마리의 벌거켜 쥐를 NC그룹(꼬리 정맥 주입 생리식염수), si-NC그룹(LV-NC꼬리 정맥 주입), si-circ_0044556그룹(LV-circ_0044556꼬리 정맥 주입), si-circ_0044556+inhibitor NC그룹(LV-circ_0044556 및 antiagomir NC꼬리 정맥 주입), 그리고 si-circ_0044556+miR-338-3p inhibitor그룹(LV-circ_0044556 및 antiagomir miR-338-3p 꼬리 정맥 주입)으로 무작위 분할하였다. 벌거켜 쥐 피하에 MDA-MB-231 세포를 주입하여 이종 이식종 모델을 구축하고 종양 부피와 질량을 측정하였다. TargetScan의 결과는 circ_0044556의 하류 miR-338-3p이 miR-338-3p의 타겟 유전자로 BRD4가 될 수 있다는 것을 보여 주었다. Mimic NC 전사체의 전도와 비교하였을 때, miR-338-3p mimic 전사체의 전도 후 MDA-MB-231 세포에서 WT-circ_0044556 발광 효소 활성도(0.34±0.03 vs. 1.00±0.15, P<0.05) 및 WT-BRD4 발광 효소 활성도(0.41±0.05 vs. 1.05±0.13, P<0.05)가 유의하게 감소하였다. MCF-10A 세포와 비교하였을 때, MDA-MB-231 세포에서 circ_0044556, BRD4 단백질 발현 수준은 유의하게 증가하였으며, miR-338-3p 발현 수준은 유의하게 감소하였다(P<0.05). NC 그룹, si-NC 그룹과 비교하였을 때, si-circ_0044556 그룹, si-circ_0044556+inhibitor NC 그룹에서 MDA-MB-231 세포의 circ_0044556 발현 수준, BRD4, N-카드헤린, 비만이드 발현 수준, 그리고 OD₄₅₀값이 유의하게 감소하였다(P<0.05); 이동, 침투 세포수가 유의하게 감소하였다(P<0.05), miR-338-3p 발현 수준, E-카드헤린 단백질 발현 수준은 증가하였으며, 세포 아포토시스율이 유의하게 증가하였다(P<0.05); miR-338-3p 저조는 MDA-MB-231 세포의 침투, 이동 및 증식을 막았다. NC 그룹, si-NC 그룹과 비교하였을 때, si-circ_0044556 그룹, si-circ_0044556+inhibitor NC 그룹의 쥐 종양 부피가 유의하게 감소하였으며, 종양 질량이 유의하게 감소하였다(P<0.05); si-circ_0044556 그룹, si-circ_0044556+inhibitor NC 그룹과 비교하였을 때, si-circ_0044556+miR-338-3p inhibitor 그룹의 쥐 종양 부피가 유의하게 증가하였으며, 종양 질량이 유의하게 증가하였다(P<0.05). 결론적으로 circ_0044556이 miR-338-3p/BRD4 축을 통해 TNBC 세포의 악성 생물학적 활동을 촉진할 수 있다.

Circ_0044556; miR-338-3p; BRD4; Triple-Negativ-Brustkrebs; Proliferation; Migration; Invasion