目的は、溶質キャリアファミリー31メンバー1（SLC31A1）の発現抑制が銅の恒常性調節を介してマウスのアルコール性脂肪肝（AFLD）病変に及ぼす影響およびその機序を探ることである。方法として、6〜8週齢の健康な雄性C57BL/6Nマウス30匹を対照群、エタノール群、プラスミド群にランダムに分け、各群10匹ずつとした。対照群には毎日対照液体飼料を与え、エタノール群とプラスミド群には毎日エタノール含有液体飼料を与えた。プラスミド群には水力学的方法で尾静脈から0.2 mlのSLC31A1-sgRNAプラスミド（2 mg/kg）を注射し、エタノール群および対照群には同容量の生理食塩水を尾静脈注射した。8週間後、眼球から採血し、マウスを安楽死させて肝臓を採取した。肝組織のSLC31A1 mRNAおよびタンパク質発現レベルをリアルタイム蛍光定量PCR（qPCR）およびウェスタンブロットで検出し、免疫組織化学法（IHC）で肝組織中のSLC31A1発現を検出した。銅含量は比色法で肝組織および血清中で測定した。マイクロプレート法で肝組織中のスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）活性およびグルタチオン（GSH）、マロンジアルデヒド（MDA）、総コレステロール（TC）、トリグリセリド（TG）含量を測定し、血清中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）活性およびTC、TG含量も測定した。ヘマトキシリン・エオシン（HE）染色、オイルレッドO染色、過ヨウ素酸-シッフ（PAS）染色により、それぞれ肝障害、脂肪蓄積、グリコーゲンの変化を検出した。ウェスタンブロットで肝組織の核因子E2関連因子2（Nrf2）、シトクロムP450ファミリー2サブファミリーEメンバー1（CYP2E1）、AMP活性化プロテインキナーゼα1（AMPKα1）、ペルオキシソーム増殖物質活性化受容体α（PPAR-α）、核因子κB p65サブユニット（NF-κB p65）、阻害タンパク質（IκB-α）、c-Jun N末端キナーゼ（JNK）、p38 MAPキナーゼ（p38 MAPK）のタンパク質発現を測定した。結果は、qPCR、ウェスタンブロット、IHCの結果、SLC31A1-sgRNAプラスミドが効果的にSLC31A1の発現を抑制することを示した（P < 0.001）。対照群と比較して、エタノール群は肝障害スコアと脂滴面積率が増加し、膠原面積率が減少した（P < 0.01またはP < 0.001）。SLC31A1陽性面積率、mRNAおよびタンパク質発現レベル、肝組織および血清中の銅含量は増加した（P < 0.001）。ALT、AST活性およびMDA、TC、TG含量は増加し（P < 0.01またはP < 0.001）、SOD活性およびGSH含量は減少した（P < 0.05またはP < 0.001）。CYP2E1タンパク質発現レベルおよびp-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκB-α/IκB-α比率は増加し（P < 0.05またはP < 0.001）、Nrf2、PPAR-αタンパク質発現レベルおよびp-AMPKα1/AMPKα1比率は減少した（P < 0.05またはP < 0.01）。エタノール群と比較して、プラスミド群は肝障害スコアと脂滴面積率が減少し、膠原面積率が増加した（P < 0.01またはP < 0.001）。SLC31A1陽性面積率、mRNAおよびタンパク質発現レベル、肝組織および血清中の銅含量は減少した（P < 0.001）。ALT、AST活性およびMDA、TC、TG含量は減少し（P < 0.05またはP < 0.01またはP < 0.001）、SOD活性およびGSH含量は増加した（P < 0.05またはP < 0.001）。CYP2E1タンパク質発現レベルおよびp-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκB-α/IκB-α比率は減少し（P < 0.05またはP < 0.01またはP < 0.001）、Nrf2、PPAR-αタンパク質発現レベルおよびp-AMPKα1/AMPKα1比率は増加した（P < 0.05またはP < 0.01）。結論として、SLC31A1の抑制は銅含量の低下を通じて、AFLDマウスの酸化ストレス障害、脂質代謝異常、炎症性損傷を軽減し、エタノール誘発性脂肪肝病変を改善する可能性がある。

アルコール性脂肪肝;溶質キャリアファミリー31メンバー1;銅;酸化ストレス;脂質代謝;炎症性損傷