目的は、ワンチューブの組換え酵素ポリメラーゼ増幅（RPA）联合CRISPR/Cas12aに基づく呼吸器合胞体ウイルス（RSV）A型の即時検出システムを構築し、その検出性能および臨床応用の可能性を評価することである。方法として、RSV-A型のMタンパクコーディング保存遺伝子配列を対象にプライマー、CRISPR/Cas12aタンパク質認識ガイドRNA（crRNA）およびプローブを設計・合成し、ワンチューブRPA-CRISPR/Cas12a検出プラットフォームを構築・最適化した。リアルタイム蛍光PCR装置または側面クロマトグラフィーストリップを用いて検出信号の即時読み取りを行い、ワンチューブRPA-CRISPR/Cas12a蛍光即時検出法およびワンチューブRPA-CRISPR/Cas12aストリップ即時検出法の2種類の即時検出法を開発した。プラスミドおよび擬似ウイルスをテンプレートとして用い、2種類の即時検出法の感度および特異度を解析した。RSV-A型またはその他3種の発熱性呼吸器症候群ウイルスを含む39例の実試料を検出し、即時検出系とゴールドスタンダードであるRT-qPCR検出結果のカッパ一致性を評価した。結果、ワンチューブRPA-CRISPR/Cas12a蛍光即時検出は37 ℃恒温条件で30分で6.1×10⁻¹コピー/μlの擬似ウイルスを検出できた。ワンチューブRPA-CRISPR/Cas12aストリップ即時検出は同条件で35分で6.1×10¹コピー/μlの擬似ウイルスを検出でき、2種類の検出法は他の3種の発熱性呼吸器症候群ウイルスとは交差反応がなかった。実試料の検出結果では、2種類の検出法の特異度はともに100%(15/15)であり、感度はそれぞれ95.8%(23/24)、91.7%(22/24)であった。RT-qPCRとのカッパ一致性検定結果はそれぞれ94.7%、89.4%であった。結論として、構築したRSV-A型即時検出システムは高い感度と特異度を有し、RSV-A型感染症の臨床診断および疫学的監視の有効なツールとして活用できる。

呼吸器合胞体ウイルスA型;組換え酵素ポリメラーゼ増幅;CRISPR-Cas12aシステム;側面クロマトグラフィーストリップ