L'objectif est de développer un système de détection instantanée du virus respiratoire syncytial (VRS) de type A basé sur une amplification par polymérase recombinante (RPA) en une seule tube联合CRISPR/Cas12a, et d'évaluer ses performances de détection et son potentiel clinique. Méthodes: en ciblant la séquence génétique conservée codant la protéine M du VRS de type A, des amorces, un ARN guide (crRNA) pour la protéine CRISPR/Cas12a et des sondes ont été conçus et synthétisés, puis une plateforme de détection RPA-CRISPR/Cas12a en une seule tube a été construite et optimisée; la lecture instantanée du signal de détection a été réalisée à l'aide soit d'un PCR fluorescent en temps réel, soit d'une bandelette de chromatographie latérale; deux protocoles de détection instantanée par fluorescence et par bandelette ont été développés; la sensibilité et la spécificité des deux protocoles ont été analysées en utilisant des plasmides et des pseudovirus comme modèles; 39 échantillons cliniques contenant le VRS-A ou trois autres virus du syndrome respiratoire fébrile ont été testés pour évaluer la concordance du système de détection instantanée avec la RT-qPCR standard par le coefficient Kappa. Résultats: la détection instantanée RPA-CRISPR/Cas12a en une seule tube a détecté 6,1×10⁻¹ copies/μl de pseudovirus en 30 minutes à 37 ℃; la détection par bandelette a détecté 6,1×10¹ copies/μl dans les mêmes conditions en 35 minutes; aucune réaction croisée avec trois autres virus du syndrome respiratoire fébrile; chez les échantillons cliniques, la spécificité était de 100 % (15/15) et la sensibilité de 95,8 % (23/24) et 91,7 % (22/24) respectivement; la concordance Kappa avec la RT-qPCR était de 94,7 % et 89,4 %. Conclusion: le système de détection instantanée RSV-A établi présente une haute sensibilité et spécificité, pouvant servir d’outil efficace pour le diagnostic clinique et la surveillance épidémiologique des infections à RSV-A.

Virus respiratoire syncytial de type A; amplification par polymérase recombinante; système CRISPR-Cas12a; bandelette de chromatographie latérale