Ziel ist der Aufbau eines Ein-Röhrchen-Rekombinase-Polymerase-Amplifikations-(RPA)-basierten Sofortnachweissystems für den respiratorischen Synzytialvirus (RSV) des Subtyps A联合CRISPR/Cas12a sowie die Bewertung seiner Nachweisleistung und seines klinischen Anwendungspotenzials. Methode: Zur konservierten Gensequenz des RSV-A-codierenden M-Proteins wurden Primer, CRISPR/Cas12a-Protein-erkennende Leit-RNA (crRNA) und Sonden entworfen und synthetisiert, wobei eine Ein-Röhrchen-RPA-CRISPR/Cas12a-Nachweisplattform aufgebaut und optimiert wurde; die Sofortablesung der Nachweissignale erfolgte entweder mittels Echtzeit-Fluoreszenz-PCR oder seitlicher Chromatographiestreifen; es wurden zwei Sofortnachweisschemata in Fluoreszenz- und Streifenform entwickelt; die Sensitivität und Spezifität der beiden Nachweisschemata wurden anhand von Plasmiden und Pseudoviren analysiert; 39 reale Proben mit RSV-A oder drei weiteren Fieber-respiratorischen Syndrom-Viren wurden getestet, um die Kappa-Kongruenz der Sofortnachweissysteme mit dem Goldstandard-RT-qPCR zu bewerten. Ergebnisse: Der Ein-Röhrchen-RPA-CRISPR/Cas12a-Fluoreszenz-Sofortnachweis konnte bei 37 ℃ innerhalb von 30 Minuten 6,1×10⁻¹ Kopien/μl Pseudovirus nachweisen; der Ein-Röhrchen-RPA-CRISPR/Cas12a-Streifen-Sofortnachweis konnte unter gleichen Bedingungen innerhalb von 35 Minuten Viruskonzentrationen von 6,1×10¹ Kopien/μl detektieren; beide Nachweisschemata zeigten keine Kreuzreaktionen mit den anderen drei Fieber-respiratorischen Syndrom-Viren; die Tests mit realen Proben ergaben eine Spezifität von 100 % (15/15) und Sensitivitäten von 95,8 % (23/24) und 91,7 % (22/24); die Kappa-Kongruenz mit RT-qPCR betrug 94,7 % bzw. 89,4 %. Schlussfolgerung: Das etablierte RSV-A-Sofortnachweissystem weist eine hohe Sensitivität und Spezifität auf und kann als effektives Werkzeug für die klinische Diagnose und epidemiologische Überwachung von RSV-A-Infektionen dienen.

Respiratorisches Synzytialvirus Typ A; Rekombinase-Polymerase-Amplifikation; CRISPR-Cas12a-System; laterale Chromatographiestreifen