Ziel ist es, die regulatorische Rolle der circ_0044556-gezielten miR-338-3p/BRD4-Achse bei malignem Verhalten von Triple-Negativ-Brustkrebszellen (TNBC) und ihrer molekularen Mechanismen zu untersuchen. Die Bindungsstellen von circ_0044556 mit miR-338-3p und miR-338-3p mit BRD4 wurden mithilfe der Online-Plattform TargetScan vorhergesagt. Der Zusammenhang von circ_0044556, miR-338-3p und BRD4 in MDA-MB-231-Zellen wurde mithilfe des Dual-Luciferase-Reportergenassays analysiert. Die Expression von circ_0044556, miR-338-3p und BRD4 wurde mittels quantitativer Echtzeit-PCR (qRT-PCR) und Western-Blotting in den TNBC-Zelllinien MDA-MB-231 und den normalen humanen Brustepithelzellen MCF-10A ermittelt. Die MDA-MB-231-Zellen wurden in die NC-Gruppe, si-NC-Gruppe (Transfektion mit si-NC), si-circ_0044556-Gruppe (Transfektion mit si-circ_0044556), si-circ_0044556+Inhibitor-NC-Gruppe (Transfektion mit si-circ_0044556 und Inhibitor-NC) und si-circ_0044556+miR-338-3p-Inhibitor-Gruppe (Transfektion mit si-circ_0044556 und miR-338-3p-Inhibitor) aufgeteilt. Die Expression von circ_0044556 und miR-338-3p sowie die Proteinexpression von BRD4, Epithelialer Cadherin (E-Cadherin), Neuronaler Cadherin (N-Cadherin) und Vimentin wurden mittels qRT-PCR bzw. Western-Blotting nachgewiesen. Die Zellproliferationsfähigkeit wurde mittels CCK-8-Assay, der Zellapoptosestatus mittels Durchflusszytometrie und die Zellinvasions- und -migrationseigenschaften mittels Transwell-Assay evaluiert. Dreißig Nacktmäuse wurden in die NC-Gruppe (intravenöse Injektion von physiologischer Kochsalzlösung), si-NC-Gruppe (intravenöse Injektion von LV-NC), si-circ_0044556-Gruppe (intravenöse Injektion von LV-circ_0044556), si-circ_0044556+Inhibitor-NC-Gruppe (intravenöse Injektion von LV-circ_0044556 und Antiagomir-NC) und si-circ_0044556+miR-338-3p-Inhibitor-Gruppe (intravenöse Injektion von LV-circ_0044556 und Antiagomir-miR-338-3p) aufgeteilt, jeweils mit sechs Tieren. Es wurde ein xenograft-Tumor Modell durch subkutane Injektion von MDA-MB-231-Zellen in die Nacktmäuse etabliert, und das Tumorvolumen und -gewicht wurden gemessen. Die Ergebnisse der TargetScan-Analyse zeigten, dass miR-338-3p ein nachgeschalteter MiRNA von circ_0044556 ist und BRD4 ein potentielles Zielgen von miR-338-3p sein könnte. Im Vergleich zur Transfektion mit Mikro NC führte die Transfektion mit miR-338-3p Mikro zu einer signifikanten Abnahme der Luciferaseaktivität des WT-circ_0044556 (0,34±0,03 vs. 1,00±0,15, P<0,05) und WT-BRD4 (0,41±0,05 vs. 1,05±0,13, P<0,05) in MDA-MB-231-Zellen. Im Vergleich zu MCF-10A-Zellen wiesen MDA-MB-231-Zellen eine signifikant erhöhte Proteinexpression von circ_0044556 und BRD4 sowie eine signifikant verringerte Expression von miR-338-3p auf (P<0,05). Im Vergleich zur NC-Gruppe und si-NC-Gruppe wiesen die circ_0044556-Gruppe und die si-circ_0044556+Inhibitor-NC-Gruppe eine signifikante Abnahme der circ_0044556-Expression, der Expression von BRD4, N-Cadherin und Vimentin sowie des OD₄₅₀-Werts (P<0,05), eine signifikante Abnahme der Anzahl von migrierenden und invasiven Zellen (P<0,05) sowie eine signifikante Zunahme der miR-338-3p-Expression, der E-Cadherin-Proteinexpression und der Apoptoserate (P<0,05) auf. Die herabregulierung von miR-338-3p hob die hemmende Wirkung der circ_0044556-Unterdrückung auf Migration, Invasion und Proliferation von MDA-MB-231-Zellen auf. Im Vergleich zur NC-Gruppe und si-NC-Gruppe wiesen die circ_0044556-Gruppe und die si-circ_0044556+Inhibitor-NC-Gruppe eine signifikante Verringerung des Tumorvolumens und des Tumorwerts auf (P<0,05); im Vergleich zur circ_0044556-Gruppe und der si-circ_0044556+Inhibitor-NC-Gruppe wies die si-circ_0044556+miR-338-3p-Inhibitor-Gruppe eine signifikante Zunahme des Tumorvolumens und des Tumorwerts auf (P<0,05). Fazit: Circ_0044556 könnte die malignen biologischen Aktivitäten von TNBC-Zellen durch den miR-338-3p/BRD4-Achse fördern.

Circ_0044556;miR-338-3p;BRD4;Triple-Negativ-Brustkrebs;Proliferation;Migration;Invasion