ويهدف هذا البحث إلى استكشاف التأثير المثبط للببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D على خلايا سرطان الثدي السلبي الثلاثي MDA-MB-231 وآليته المحتملة. تم استخدام طريقة CCK-8 لاختبار تأثير الببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D بتراكيز 0، 10، 15، 20، 25، 30، 35، 40 ميكرومول/لتر على انتشار خلايا MDA-MB-231؛ تم استخدام تجربة Pull down لتحديد البروتينات المتفاعلة للببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D مع خلايا MDA-MB-231. تم أخذ خلايا MDA-MB-231 وتقسيمها إلى: (1) مجموعة مرجعية ومجموعتي معالجة بتراكيز 10 و 20 ميكرومول/لتر من الببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D، وتم استخدام فحص الفلوسيتومتر لاختبار حالة وفاة الخلايا واستخدام فحص Western blotting لاختبار التغير في تعبير البروتين المقترن الثقيل (BiP) وبروتين kinase R-like endoplasmic reticulum kinase (PERK) وعامل بدء الترجمة البؤري 2α (eIF2α) وعامل eIF2α المُفَسفَر (p-eIF2α) وبروتين Bax. (2) مجموعة السيطرة (غير المطعمة بأي جزئيات) ومجموعة si-BiP-592 (تطعيم مع وصمة ديفل بإزعاج si-BiP-592) ومجموعة si-BiP-592+WK-13-3D (تطعيم مع وصمة ديفل بإزعاج si-BiP-592 بالإضافة إلى 10 ميكرومول/لتر من الببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D)، وتم استخدام فحص Western blotting لاختبار التغير في تعبير BiP وPERK وeIF2α وp-eIF2α وبروتين Bax. تم تقسيم 12 فأراً BALB/c عشوائياً إلى مجموعة PBS (n=4) ومجموعة تاكسول (TAX) (n=4) ومجموعة WK-13-3D (n=4). تم حقن جميع الفئران تحت الجلد بخلايا MDA-MB-231 لإنشاء نموذج لورم الثدي السلبي الثلاثي. تم حقن مجموعة WK-13-3D بالببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D [200 ملغ/(كغ.يوم)]، وتم حقن مجموعة TAX بتاكسول [200 ملغ/(كغ.يوم)]، وتم حقن مجموعة PBS بنفس حجم محلول PBS. تم القضاء على الفئران بعد أسبوعين من الحقن، وتم قياس وزن وحجم الأورام والتقاط الصور، وتم استخدام التلون المناعي لاختبار تعبير البروتينات BiP وKi-67 في أنسجة الأورام. أظهرت نتائج اختبار CCK-8 أن نسبة بقاء خلايا MDA-MB-231 تنخفض تدريجياً مع زيادة تركيز الببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D، وكان تركيز الإثبات الحيوي النصفي (IC50) هو 19.82 ميكرومول/لتر. تحديث Pull-down أظهر تطابق الببتيد المضاد للميكروبات مع 268 بروتيناً لخلايا MDA-MB-231، تضمنت بشكل رئيسي BiP وبروتين الحرارة 90β1 (HSP90B1) وبروتين peptide b (VCP) وبروتين HSPA8 بوزن 71 كيلو دالتون. بالمقارنة مع مجموعة السيطرة، زادت نسبة وفاة خلايا MDA-MB-231 بشكل ملحوظ في معالجة بتراكيز 10 و 20 ميكرومول/لتر من الببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D (P<0.05 أو P<0.01)، وتنخفض مستويات تعبير بروتين BiP في الخلايا بشكل ملحوظ (P<0.05)، وترتفع مستويات تعبير PERK وp-eIF2α وبروتين Bax بشكل ملحوظ (P<0.05 أو P<0.01)، وتبقى مستويات تعبير بروتين eIF2α دون تغيير ملحوظ (P>0.05). بالمقارنة مع مجموعة si-BiP-592، تنخفض مستويات تعبير بروتين BiP في خلايا MDA-MB-231 (P<0.05)، وترتفع مستويات تعبير PERK وp-eIF2α وبروتين Bax بشكل ملحوظ (P<0.05 أو P<0.01)، وتبقى مستويات تعبير بروتين eIF2α دون تغيير ملحوظ (P>0.05)، وبالمقارنة مع مجموعة si-BiP-592، تنخفض مستويات تعبير بروتين BiP في خلايا MDA-MB-231 بشكل ملحوظ (P<0.05)، وترتفع مستويات تعبير PERK وp-eIF2α وبروتين Bax بشكل ملحوظ (P<0.05 أو P<0.01)، وتبقى مستويات تعبير بروتين eIF2α دون تغيير ملحوظ (P>0.05). أظهرت الفئران التي تم علاجها بالببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D والتاكسول أن حجم الأورام يقل بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة PBS (P<0.05)، وأظهرت نتائج التلوين المناعي أن نسبة الخلايا الإيجابية لبروتينات Ki-67 وBiP في أنسجة الأورام لدى الفئران التي تم علاجها بالببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D تقل بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة PBS (P<0.01). يمكن للببتيد المضاد للميكروبات WK-13-3D أن يكبح انتشار خلايا MDA-MB-231، ويظهر آليته المحتملة بتنشيط التوتر في شبكة الاندوبلازمية وتحفيز وفاة الخلايا.

الببتيد المضاد للميكروبات; سرطان الثدي السلبي الثلاثي; توتر الشبكة الاندوبلازمية; وفاة الخلية