تأثير miR-375 المستهدف لبروتين FOXM1 على تكاثر وبرمجة موت خلايا البشرة البشرية المحفزة بواسطة IL-22
摘要
الهدف هو استكشاف تأثير الرنا الصغير ميكروRNA-375 (miR-375) الذي يستهدف بروتين صنف الصندوق-الجزء M1 (FOXM1) على تكاثر وبرمجة موت خلايا البشرة البشرية التي يحفزها الإنترلوكين (IL)-22. الطريقة: جمع الأنسجة من مرضى الصدفية (مجموعة الاختبار، n=35) وأنسجة الجلد الطبيعية من أشخاص خضعوا لعمليات جراحية تجميلية (مجموعة التحكم، n=35) بشكل استعادي. جُزئت خلايا البشرة HaCaT عشوائياً إلى مجموعة التحكم، مجموعة IL-22، مجموعة miR-NC، مجموعة miR-375 (زيادة التعبير عن miR-375)، مجموعة miR-375+pcDNA (زيادة التعبير عن miR-375)، ومجموعة miR-375+FOXM1 (زيادة التعبير عن كل من miR-375 وFOXM1). عولجت جميع المجموعات غير مجموعة التحكم بـ IL-22. تم قياس مستويات التعبير عن miR-375 وmRNA الخاص بـ FOXM1 باستخدام qRT-PCR؛ تم تقييم تكاثر الخلايا باستخدام اختبار MTT وصبغة EdU؛ تم قياس دورة الخلية ومعدل موت الخلايا بالفلورمتر الخلوي؛ تم تقييم قدرة الخلايا على الانتشار باستخدام اختبار Transwell؛ تم قياس مستويات IL-6، IL-17A، CXCL1، CXCL2 بواسطة ELISA؛ تم تقييم تعبير بروتينات FOXM1، Bcl-2، Bax بواسطة Western blotting؛ وتم التحقق من العلاقة الاستهدافية بين miR-375 وFOXM1 بواسطة اختبار اللكتاز المزدوج. النتائج: مقارنة بمجموعة التحكم، لوحظ انخفاض في مستوى التعبير عن miR-375 وارتفاع في mRNA الخاص بـ FOXM1 في أنسجة مرضى الصدفية (P < 0.05). مقارنة بمجموعة التحكم، شهدت خلايا HaCaT في مجموعة IL-22 انخفاضًا في مستوى التعبير عن miR-375، نسبة الخلايا في المرحلة G0/G1، معدل موت الخلايا، ومستوى التعبير عن بروتين Bax (P < 0.05)، بينما ارتفعت نسبة بقاء الخلايا، نسبة الخلايا الإيجابية لصبغة EdU، نسبة الخلايا في المرحلة S، عدد الخلايا المهاجرة، ومستويات IL-6، IL-17A، CXCL1، CXCL2، FOXM1، وBcl-2 (P < 0.05). مقارنة بمجموعة miR-NC، أظهرت مجموعة miR-375 زيادة في مستوى التعبير عن miR-375، نسبة الخلايا في المرحلة G0/G1، معدل موت الخلايا، ومستوى التعبير عن بروتين Bax (P < 0.05)، وانخفاضًا في بقاء الخلايا، نسبة الخلايا الإيجابية لصبغة EdU، نسبة الخلايا في المرحلة S، عدد الخلايا المهاجرة، ومستويات FOXM1، Bcl-2، IL-6، IL-17A، CXCL1، CXCL2 (P < 0.05). مقارنة بمجموعة miR-375+pcDNA، أظهرت مجموعة miR-375+FOXM1 انخفاضًا في نسبة الخلايا في المرحلة G0/G1، وارتفاعًا في نسبة الخلايا في المرحلة S وعدد الخلايا المهاجرة (P < 0.05). أظهرت نتائج اختبار اللكتاز المزدوج أن miR-375 يمكنه الارتباط بالنمط البري لـ FOXM1. الخلاصة: يمكن لـ miR-375 تثبيط تكاثر خلايا البشرة البشرية التي يحفزها IL-22 عن طريق استهداف FOXM1 وتحفيز موتها المبرمج.
关键词
ميكروRNA-375; بروتين صنف الصندوق M1; خلايا البشرة; تكاثر; برمجة الموت