الهدف هو بناء نظام كشف فوري لنوع فيروس الجهاز التنفسي الخلوي (RSV) من النوع A يعتمد على تضخيم إنزيم إعادة التركيب أحادي الأنبوب (RPA)联合CRISPR/Cas12a، وتقييم أداء الكشف وإمكانات التطبيق السريري. طريقة: استهداف تسلسل جين M البروتيني المحفوظ لنوع RSV-A، تم تصميم وبناء البرايمرات، RNA التعليمي (crRNA) للتعرف على بروتين CRISPR/Cas12a، والمسبار، وتم إنشاء وتحسين منصة الكشف RPA-CRISPR/Cas12a أحادية الأنبوب؛ واستخدمت إما آلة تفاعل البوليميراز المتسلسل الفلوري الفوري أو شريط التحليل الجانبي للقراءة الفورية لمصدر الكشف، وتم تطوير مخططين للكشف الفوري: RPA-CRISPR/Cas12a الفلوري وشريط التحليل الجانبي؛ باستخدام البلازميد والفيروسات الزائفة كقوالب، تم تحليل حساسية وتخصص المخططات الكشفية؛ وفحصت 39 عينة حقيقية تحتوي على RSV-A أو ثلاثة أنواع أخرى من فيروسات الجهاز التنفسي الحموية، لتقييم توافق نظام الكشف الفوري مع معيار الذهب RT-qPCR باستخدام اختبار كابا. النتائج: يمكن لكشف RPA-CRISPR/Cas12a الفلوري أحادي الأنبوب اكتشاف 6.1×10⁻¹ نسخ/μl من الفيروس الزائف في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية؛ ويمكن الكشف باستخدام شريط التحليل الجانبي في نفس الظروف خلال 35 دقيقة للكشف عن 6.1×10¹ نسخ/μl من الفيروس الزائف؛ ولا يوجد تداخل مع ثلاثة فيروسات أخرى للجهاز التنفسي الحموية؛ وأظهرت نتائج الفحص على العينات الحقيقية أن تخصص كل من المخططات كان 100%(15/15)، والحساسية كانت 95.8%(23/24) و 91.7%(22/24) على التوالي؛ وكانت نتائج توافق كابا مع RT-qPCR 94.7% و 89.4%. الخلاصة: نظام الكشف الفوري لـ RSV-A الذي تم إنشاؤه يمتاز بحساسية وتخصص عاليتين، ويمكن استخدامه كأداة فعالة للتشخيص السريري ومراقبة الأوبئة لعدوى RSV-A.

فيروس الجهاز التنفسي الخلوي النوع A;تضخيم إنزيم إعادة التركيب;نظام CRISPR-Cas12a;شريط التحليل الجانبي