تهدف هذه الدراسة إلى استكشاف آلية كيفية تنظيم RNA غير المُشَفَّر طويل السلسلة (lncRNA) AI662270 لمقاومة الأنسولين في خلايا الدهون لفئران الشيخوخة. الطريقة (1) تم تقسيم 20 فأرًا ذكورًا من سلالة C57BL/6 عشوائيًا إلى مجموعة شباب ومجموعة كبار السن (n=10)، حيث تم إيقاف تربيه فئران المجموعة الشبابية عند سن 4 أشهر وظروف القتل عن طريق تخدير الحيوان بالعمى بدون توصيل الأوعية الدموية وتم إيقاف تربيه فئران المجموعة كبار السن حتى سن 18 شهرا وبعد ذلك تم قتلها بنفس الطريقة بالسحل من الجهاز التناسلي ونزع الأنسجة من البيض الدهني اللوني (eWAT) والكبد. استُخدمت تقنية Western blotting لاختبار مستوى بروتين جين مُثُبِّط للورم1 (p16ink4a)، وكذلك تكشيف الانسجام الفيتولوجي للبروتين في المرحِّلة الخلوية المعتمد على السيكل (p21kip1)، واستُخدمت تقنية RT-qPCR لتحليل مستوى 4 RNA غير المُشَفَّر المختلفة (C4a، AI662270، BATE1، GM29719). وتم استخراج الخلايا الليفية الجنينية (3T3-L1) وتم تقسيمها إلى مجموعة الضابط الطبيعي (منقحة لتمايز الخلايا الدهنية الناضجة بعد يوم من التقسيط) ومجموعة نموذج الشيخوخة (معالجة بأدرييتين (ADR) بتركيز 0.2 ميكرومول / لتر ADR لبناء نموذج الخلية الدهنية المتقدمة في السن). ثم تم استخراج القليل من انزيم بيتا-غالاكتوسيداز لمراقبة تلوين الخلية الدهنية؛ تم استخدام تقنية RT-qPCR لتحليل مستوى AI662270 وعلامات الشيخوخة (p16ink4a، p21kip1، p53) وتم تشخيص ذلك، وتم استخدام تقنية Western blotting لاختبار مستوى بروتين مجموع TTL H2A المُفْسِر (جاما-H2AX)، وكذلك مستويات بروتين p16ink4a، وكذلك المستوى بروتين p21kip1. (2) تم استخدام تقنية جلوكوكيناز الصبغة لاختبار تركيز السكر في المصل الفأري وذلك في بيئة تربية خلايا الدهون 3T3-L1؛ اعتمد أيضًا على تقنية RT-qPCR لتحليل RNA في الأنسجة الدهنية وخلايا الدهن عن بعد جينات الحساسية البنكرياسية الدقيقة للأنسولين الأساسية (Akt)، بروتين المستقبل الخلطي لأنسولين1 (IRS1)، فسفوكيناز اللافسفة الدقيقة 3 (PI3K)، مُستقلات الغلوكوز4 (GLUT4)؛ واستخدمت تقنية Western blotting لاختبار مستوى بروتينات (p-Akt و Akt). (3) توجد مراجعة الارتباط العالة التحليلية لاستكشاف مستوى تعبير AI662270 ومستوى تعبير RNA (IRS1، PI3K)، وتم تأكيد بنيتها بالأدلة وتم استخدام تقنية RT-qPCR لمنتج C4a وتحليلات Western blotting وكذلك البحث البيولوجي لكشف المستوى العالي لتعبير البروتين اللائق Akt؛ استخدمت سلسلة مدققة السكر الصبغتية لاختبار مستوى السكر في المخاليط الخلوية التي استندت إلى تدخل AI662270؛ واستُخدمت تقنية RT-qPCR لتحليل العينات في نسبة (Akt) المستقلة المؤكدة للأنسولين (IRS1، IRS2، PI3K)، وكان لدينا تقدما في هكذا البحث. (4) تم تقدير التحليل الإحصائي والتنبؤي لاستكشاف مستوى تعبير AI662270 والجينات المبطنة لها والموقع المواتي، وتم استخدام تقنية RT-qPCR وكذلك الكشف البيولوجي لتأكيد مستوى تعبير البروتين. النتائج: بالمقارنة مع الفئران الشبابية، زادت كثيرا مستويات البروتين p16ink4a، p21kip1 في eWAT لدى الفئارن كبار السن، وكذلك كانت هناك زيادة ملحوظة في AI662270 وC4a وBATE1 وGM29719 في eWAT والكبد (P <0.05). أظهرت نتائج تلوين بيتا-غالاكتوسيدا أن خلايا الدهون التي تعرضت لدواء ADR كانت تظهر تحسن بدني وكان هناك زيادة في AI662270 ومستويات mRNA الخاص بـ p16ink4a وp21kip1 والبروتين (P <0.05). (2) بالمقارنة مع الفئران الشبابية، زاد تركيز السكر في المصل الفأري بشكل ملحوظ (P <0.01)، وبالمقارنة مع المجموعة الضابطة، كان هناك زيادة ملحوظة بتركيز السكر في محلول خلايا الدهون ADR (P <0.05)؛ بالمقارنة مع الفئران الشبابية، نقصت بشكل ملحوظ كل من مستويات IRS1 وPI3K في eWAT (P <0.01)؛ وكان هناك تقليل ملحوظ في مستويات IRS1 وPI3K في خلايا الدهون ADR (P <0.05)؛ أظهرت نتائج التحاليل الإحصائية الإحصائية المرتبطة بالارتباط إلى أن مستوى AI662270 ومستوى تعبير RNA الخاص بـ IRS1 وPI3K كان يظهر انحرافًا سالبًا كبيرًا (P <0.05)

الشيخوخة؛ البيض الدهني اللوني؛ المقاومة للأنسولين؛ RNA غير المُشَفَّر طويل السلسلة AI662270